优化宿主菌在重组系统中构建大容量天然噬菌体抗体库

摘要：

制备大容量天然噬菌体抗体库.从健康成人外周血和新生儿脐带血中提取淋巴细胞总RNA,反转录后PCR分别扩增抗体重链和轻链基因.将获得的基因片段通过overlap PCR连接为单链抗体基因(scFv),限制性内切酶酶切后连入pDAN5a载体中,连接产物转化大肠杆菌XL2-blue MRF’.与XLl-blue菌株相比,初级库库容增加了3.9倍.再将初级库噬菌体感染含有Cre重组酶的大肠杆菌BS1365,抗体基因在重组酶作用下发生同源重组,最终得到库容为1.7×1011的噬菌体抗体库.经检测,该抗体库多样性良好,利用该库可获得针对6种抗原的抗体.以上结果表明,应用XL2-blue MRF’作为抗体基因的转化宿主,提高了噬菌体抗体库的库容,获得的抗体库可用于下一步抗体药物的筛选.

关键词：噬菌体展示、抗体库、重组系统、宿主菌

所属期刊栏目：48

分类号：R963(药理学)

资助基金：科技部国际合作项目2010DFB32900;国家自然科学基金重点项目81030056;教育部"长江学者和创新团队发展计划"创新团队IRT1007;博士点基金20111106110030

在线出版日期：2013-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：66-70