金丝桃素合酶基因的快速克隆及功能鉴定

摘要：

金丝桃素合酶能催化大黄素生成金丝桃素,根据已发表的金丝桃素合酶的基因序列,设计了6对引物,通过连续重叠PCR快速克隆得到了金丝桃素合酶基因hyp-1.构建含hyp-1基因的原核表达载体pET32ahyp,将该载体导入大肠杆菌进行诱导表达.SDS-PAGE结果表明,hyp-1基因在大肠杆菌中获得表达;Western blot结果表明,重组的Hyp-1蛋白具有特异的免疫活性,表明hyp-1基因在E.coli中得到了表达.酶促反应表明,Hyp-1确实能催化大黄素形成金丝桃素,上述结果表明,本研究克隆的hyp-1基因是金丝桃素合酶基因,具备催化大黄素形成金丝桃素的能力,从而为通过合成生物学技术制备金丝桃素奠定了物质基础.

关键词：金丝桃素合酶、快速克隆、功能鉴定

所属期刊栏目：47

分类号：R931(生药学（天然药物学）)

资助基金：国家重点实验室重点项目A-2011-5

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：670-676