腺病毒-阴离子脂质体复合物的制备和体外表征

摘要：

为了制备腺病毒-阴离子脂质体复合物(AL-Ad5),首先利用HEK 293细胞大量扩增了带有绿色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒,并以氯化铯两步密度梯度离心法进行纯化,再通过细胞病变效应(CPE)法、壳蛋白免疫法和定量聚合酶链反应(Q-PCR)法分别测定腺病毒滴度.以中心组合设计法优化处方和制备条件,通过钙离子融合法制备目标复合物AL-Ad5,以透射电镜和动态光散射法分别对其外观形态、粒径和zeta电位进行考察；并制备双色荧光标记的复合物,通过激光共聚焦技术观察该复合物被MDCK细胞摄取后的胞内定位,以考察阴离子脂质体对腺病毒的包合情况.结果表明,目标复合物分布均匀,粒径和zeta电位分别为(211±10) nm和(-41.2±2.2) mV.激光共聚焦实验结果表明,红色荧光标记的腺病毒和绿色荧光标记的脂质体在MDCK细胞内的定位一致.由此说明,阴离子脂质体能够较好地包裹腺病毒以形成腺病毒-阴离子脂质体复合物.

关键词：腺病毒、阴离子脂质体、中心组合设计、钙离子融合法、激光共聚焦、壳蛋白免疫染色、定量聚合酶链反应

所属期刊栏目：47

分类号：R943(药剂学)

资助基金：国家自然科学基金81173011

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：116-123