重组复制型溶瘤腺病毒p53的质量控制方法

摘要：

建立重组复制型溶瘤腺病毒p53 (SG600-P53)的质控检测方法与质量标准.采用限制性内切酶酶切、PCR法对端粒酶启动子、低压缺氧调控元件融合的巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子、p53基因等重组病毒载体结构进行分析,鉴定结果均与理论值相符.经紫外吸收法(A260)检测,病毒颗粒数为2.0×10(11)VP·mL-1；TCID50法测定感染活性为5.0×1010 IU·mL-1.p53蛋白ELISA检测结果表明,重组病毒体外感染人肺癌细胞H1299后,感染组核蛋白和空白对照组A450吸收度之比为5.2.该基因治疗制剂对人肺癌细胞A549体外杀伤的MOIIC50为1.0.以相同MOI感染并经TCID50法检测,重组病毒在人肺癌细胞A549与人表皮成纤维二倍体细胞BJ的增殖比值为398.经阴离子高效液相色谱分析,病毒载体颗粒纯度为99.5％.定量PCR检测表明在1×107VP的病毒颗粒中,野生型腺病毒基因片段少于1个拷贝.本研究建立的重组复制型溶瘤腺病毒的质量标准与检测方法,可用于该制品的质量控制,同时也为其他溶瘤基因治疗病毒载体质控研究提供参考.

关键词：腺病毒载体、肿瘤溶瘤基因治疗、p53基因、质量控制

所属期刊栏目：46

分类号：R917(药物基础科学)

在线出版日期：2012-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1476-1482