脱氧萎镰菌醇通过下调GRP78提高双链转FⅧ基因细胞分泌重链和生物活性

摘要：

双链转凝血Ⅷ因子(FⅧ)基因是克服AAV载体容量限制的有效方法,但重链分泌的低效性带来链不均衡性.本文旨在用脱氧萎镰菌醇(deoxynivalenol,DON)降解内质网分子伴侣蛋白GRP78,通过减少重链与GRP78的结合提高重链分泌,改善双链转FⅧ基因的功效.用DON处理双链共转基因细胞,观察了双链转FⅧ基因293细胞分泌的重链和FⅧ活性.结果显示,用500 ng·mL-1 DON处理细胞3h后,GRP78蛋白水平明显降低,细胞的生长不受明显影响；单独转FⅧ重链基因的DON处理细胞分泌的重链量”(59±11) ng·mL-1”明显高于对照细胞”(15±4)ng·mL-1”,双链共转基因时重链的分泌量进一步增加,为(146±34) ng·mL-1,活性达到(0.66±0.15) U·mL-1,明显高于双链转基因对照细胞”分别为(76±17) ng·mL-1和(0.35±0.09) U·mL-1”.结果表明,DON可通过下调GRP78改善重链的分泌性,提高双链转FⅧ基因的功效,为进一步动物体内双AAV载体转FⅧ基因提供了实验依据.

关键词：凝血Ⅷ因子、双链转基因、脱氧萎镰菌醇、重链分泌

所属期刊栏目：46

分类号：Q51;R963(蛋白质)

资助基金：山东省自然科学基金ZR2010CM061;烟台市科技计划项目2008152;教育部留学回国人员科研启动基金20071108;鲁东大学学科建设经费资助项目

在线出版日期：2012-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1457-1461