千层塔中Ⅲ型聚酮合酶基因的克隆、表达与功能鉴定

摘要：

Ⅲ型聚酮合酶是以合成聚酮类化合物为主的一类重要生物合成酶.本文利用逆转录聚合酶链反应从中草药千层塔新鲜嫩叶中扩增聚酮合酶基因,得到一个Ⅲ型聚酮合酶全长cDNA.该基因全长1 212 bp,编码404个氨基酸.与已知的其他植物来源的聚酮合酶氨基酸序列有约50％～66％的同源性.cDNA经双酶切后克隆至pQE81L,并导入大肠杆菌(E.coli) M15中表达,产生大量带寡聚组氨酸标记的重组酶,重组酶分子质量大小约为46.4 kDa.酶活性鉴定研究表明,该重组酶可催化芳香族底物、脂肪族底物生成系列非天然聚酮产物,尤其是其可催化N-甲基邻氨基苯甲酰CoA和丙二酰CoA生成1,3-二羟基-N-甲基-吖啶酮,吖啶酮生物碱一直被认为只能由吖啶酮合酶合成.该工作为研究千层塔中Ⅲ型聚酮合酶在天然药物石杉碱甲生物合成中的作用奠定基础.

关键词：千层塔、Ⅲ型聚酮合酶、基因克隆

所属期刊栏目：46

分类号：R93l(生药学（天然药物学）)

资助基金：浙江省自然科学基金;浙江省卫生厅项目

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1273-1278