双载体断裂CFTR基因转移及翻译后的连接和功能
囊性纤维化跨膜电导调节体(CFTR)基因突变导致一种常染色体隐性遗传病囊性纤维化(CF),利用腺辅助病毒(AAV)载体转运CFTR基因的基因疗法受到AAV载体容量的限制.本文采用intein的蛋白质反式剪接技术,以双载体转运CFTR基因,研究了于其调节结构域(R)断裂成两部分的CFTR基因翻译后的连接及其产生的Cl~-通道功能.将人CFTR cDNA于R结构域的Ser~(713)密码子前断裂,构建一对融合Ssp DnaB intein编码序列的真核表达载体.将这对载体共转染培养的幼年仓鼠肾(BHK)细胞,通过瞬时表达,全细胞和单通道膜片钳记录Cl~-电流,并用Western blotting观察CFTR蛋白的剪接.结果表明,共转染细胞显示较高的全细胞Cl~-电流和单个Cl~-通道开放活性,说明CFTR的Cl~-通道功能的恢复,用CFTR特异性抗体进行的细胞总蛋白Western blotting显示有完整的CFTR蛋白条带形成,表明intcin可有效连接翻译后的两部分CFTR蛋白.结果提示,蛋白质剪接技术可有效用于双载体系统转运CFTR基因,为进一步应用双AAV载体转运CFTR基因的CF基因治疗研究提供了实验依据.
蛋白质反式剪接、囊性纤维化跨膜电导调节体基因、氯离子通道、双载体系统
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Q73(生物膜的结构和功能)
山东省自然科学基金Y2005D14;烟台市科技计划项目2008152;教育部留学回国人员科研启动基金;鲁东大学学科建设经费资助项目
2010-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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