丹参柯巴基焦磷酸合酶基因的优化表达、纯化及抗体制备

摘要：

用含丹参柯巴基焦磷酸合酶(Salvia miltiorrhiza copalyl diphosphate synthase, SmCPS)基因的重组质粒pET32CPS转化大肠杆菌BL21trxB(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE结果表明SmCPS基因在大肠杆菌中获得了表达;对影响可溶性表达的4个因素,即诱导温度、IPTG诱导浓度、诱导时宿主菌的密度(A600)和诱导时间进行了优化.结果发现在宿主菌A600达到1.0时加入0.4mmol·L-1 IPTG,在20℃诱导培养8h表达的可溶性蛋白量最高,约占细胞总蛋白的35.6%.用Ni2+亲和色谱法纯化表达产物,纯化蛋白产率达到12.3mg·L-1.将纯化蛋白免疫制备兔源SmCPS抗血清,ELISA测定效价为1:24300,且经Western blotting鉴定该抗体可特异性识别SmCPS抗原,获得了效价高、免疫反应性好的SmCPS多克隆抗体,为进一步从蛋白水平研究SmCPS表达与丹参酮类有效成分生物合成相关性提供了物质基础.

关键词：丹参、柯巴基焦磷酸合酶、优化表达、抗体制备

所属期刊栏目：43

分类号：R915(药物基础科学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划资助项目2006CB504700;国家高科技研究发展计划资助项目2007AA02Z104;中国中医科学院基本科研业务费自主选题项目ZZ2006098

在线出版日期：2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：766-772