1型人类免疫缺陷病毒tat基因重组分泌型真核表达载体的构建

摘要：

目的 构建人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)tat基因分泌型真核表达载体.方法 聚合酶链反应(PCR)法从缺失pol基因的重组HIV-1基因组pNL4-3中扩增tat基因;将PCR获得的tat基因片段和pSecTag2B分泌型真核表达载体分别用Hind III酶切;pSecTag2B载体片段经小牛碱性磷酸酶去磷酸化后,用T4 DNA连接酶将tat基因与pSecTag2B载体片段连接过夜并转化感受态大肠杆菌DH5α,提取阳性克隆质粒进行Hind III酶切鉴定,并利用Nco I酶切鉴定克隆的tat基因反向.最后选取正向tat基因克隆质粒送基因测序.结果 PCR扩增产物在1%琼脂糖凝胶上约320bp位置出现条带,与预期的324bp大小一致;经Hind III和Nco I分别酶切鉴定,获得2个正向克隆;正向克隆经测序,克隆的tat基因序列与Genbank中登记的HIV-1 tat基因100%同源.结论 本研究方法可以成功地构建HIV-1 tat基因分泌型真核表达载体.

关键词：人类免疫缺陷病毒1型、tat基因、分泌型真核表达载体

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分类号：R349.83(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：广西自然科学基金项目桂科自0728246,桂科青0728105;广西教育厅项目桂教科研[2006]26号200610LX123;右江民族医学院项目右医科字[2007]2号;广西百色市科学研究与技术开发计划课题百科计字[2006]13号

在线出版日期：2012-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：347-350