Clusterin 蛋白在大肠杆菌中的表达及其多抗制备

摘要：

目的：在大肠杆菌中表达Clusterin蛋白，并制备其兔抗Clusterin蛋白的多克隆抗体。方法：从MCF-7细胞提取mRNA ，逆转录为cDNA ，以此为模板PCR扩增Clusterin编码基因；将Clusterin编码区cDNA插入的pRSET-A原核表达载体，构建pRSET-A-clusterin ；将重组质粒转化BL21（DE3）感受态细菌，以IPTG诱导6× His-Clusterin融合蛋白的表达，经亲和纯化柱与凝胶柱进行层析纯化。经SDS-PAGE和Western-blot鉴定后，将纯化的融合蛋白与弗氏佐剂混合制备成油包水悬液，常规免疫新西兰大白兔制备多抗，Western-blot检测该抗体识别内源性clusterin的特异性。结果：成功构建了Clusterin蛋白的原核表达载体pRSETA-clusterin ；经表达并纯化的Clusterin蛋白纯度达到98％以上，免疫新西兰大白兔后制备得到了特异性的抗Clusterin的多抗。结论：成功地表达并纯化了Clusterin蛋白，并制备了特异性抗Clusterin多抗。

关键词：Clusterin、原核表达、蛋白纯化、多抗

分类号：R378.2+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No ．81001161。

在线出版日期：2013-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：3081-3083,3097