10.19960/j.issn.1005-0698.202306010
红芪多糖"脱蛋白-大孔吸附树脂"的纯化富集工艺考察
目的 研究红芪多糖(HPS)标准提取物,筛选优化其"脱蛋白-大孔吸附树脂纯化富集"的工艺方法与工艺参数.方法 以蛋白脱除率和多糖损失率为指标,比较 4 种不同方法的脱蛋白效果,并对筛选出的方法进行工艺参数优化;以吸附量和吸附率为指标,考察 4 种型号大孔吸附树脂(AB-8、D-101、NKA-9、X-5)对HPS的纯化富集效果,并进行相关工艺参数优化;采用苯酚硫酸法和考马斯亮兰法分别测定多糖和蛋白质含量;采用紫外分光光度(UV)和红外光谱(IR)法比较纯化前后多糖的基本特征.结果 筛选出的脱蛋白方法为Sevag法,优选的树脂为AB-8 大孔吸附树脂.通过工艺参数优选,确定的纯化工艺为:10 mg·mL-1 粗多糖水溶液,以 1/2 倍体积氯仿-正丁醇(4∶ 1,v/v)混合试剂进行脱蛋白操作 2 次;除去残留有机溶剂后,以质量浓度为 1.5 mg·mL-1 的水溶液,上预处理好的AB-8 大孔吸附树脂柱[树脂量(g)与上样体积(v)比为 1∶ 10],以 2.0?mL·min-1 流速循环上样 2 次,动态吸附后再静态吸附 6～8 h,后以 30%乙醇 1.0?mL·min-1 进行洗脱,至洗脱液无明显碱性酒石酸铜反应,收集洗脱液浓缩至与原药 1∶ 1,加无水乙醇至含醇量 80%,沉淀 10 h,抽滤,以无水乙醇、丙酮冲洗沉淀,即得HPS.结论 验证试验表明,经本工艺纯化富集后,所得HPS样品纯度提高了 1.27 倍;UV在 260,280?nm处未见蛋白质吸收峰;IR表现出更突出的多糖结构特征吸收峰,说明纯化过程有效且未对HPS主要结构产生影响.优选出的HPS脱蛋白和大孔树脂纯化工艺稳定可行,重复性较好,使多糖得到较好的纯化富集,为HPS标准提取物的形成以及其能成为制剂科学化原料药提供了研究基础.
红芪多糖、脱蛋白、大孔吸附树脂、纯化工艺
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R284.2;TS201.1;R975.6
甘肃省科技计划自然科学基金项目;甘肃省科技计划自然科学基金项目;兰州市城关区科技计划项目;甘肃省教育厅双一流重大科研项目;甘肃省中药制药工艺工程研究中心开放课题;中医药公共卫生服务补助专项子课题
2023-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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