A型肉毒抗毒素ELISA方法的建立及验证

摘要：

目的:建立定量检测A型肉毒抗毒素效价的酶联免疫吸附法(ELISA法),并进行验证.方法:以A型肉毒类毒素为包被抗原包被酶标板,封闭后加入稀释的血清样品,以辣根过氧化物酶标记的兔抗马IgG(IgG-HRP)作为酶标抗体,加入四甲基联苯胺显色剂(TMB)显色10～15 min,2 mol·L-1硫酸终止反应,于酶标仪上读取A450nm值,以标准曲线样品浓度的对数(X)为横坐标,A450nm值(Y)为纵坐标绘制标准曲线,将待测血清样品A450nm值代入曲线方程即可得到血清样品浓度,乘以稀释倍数即为血清样品效价.结果:在优化的条件下,该方法具有较高的特异性,除了与A型肉毒抗毒素血清反应外,对B、C、D、E、F型肉毒抗毒素血清均无交叉反应;在线性范围50～400 mIU·mL-1时线性关系良好,r＞0.990 0;准确度介于80％～120％;精密度(重复性和中间精密度)RSD＜20％;采用该方法测定20批A型肉毒抗毒素血清的效价范围在525～2 450IU·mL-1,中和试验法检测范围在675～2 400IU·mL-1,二者的相关系数r=0.906 0(P＜0.001),呈显著性正相关.结论:建立的ELISA定量检测方法在实验室条件下可以取得稳定的结果,为A型肉毒抗毒素效价的测定提供了一种简便的体外检测方法.

关键词：A型肉毒抗毒素、ELISA方法、小鼠中和试验法、定量检测、效价测定、验证

所属期刊栏目：43

分类号：R917(药物基础科学)

在线出版日期：2023-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：525-530