中药材茯苓PCR鉴定与特征

摘要：

目的:建立针对真菌类中药材茯苓的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴定技术,从分子生物学角度出发,对茯苓的真伪进行鉴定.方法:对经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法进行改良,提取样品基因组DNA,以茯苓内转录间隔区(internal transcribed space,ITS)为目的序列,设计特异性引物,优化PCR反应体系,建立茯苓PCR鉴定方法,同时克隆特异性扩增的目的条带,测序鉴定其准确性,最后进行方法学验证.结果:提取的基因组DNA浓度较高、纯度较好、完整度良好.琼脂糖凝胶电泳结果表明正品茯苓可以在199 bp处出现单一明亮的特异性扩增条带,而伪品不出现扩增条带,引物的特异性为100％,克隆后的目的片段电泳图谱清晰明亮,克隆片段与Genbank数据库中已登记的茯苓物种序列相似性高达100％.在操作人员不知样品真伪的情况对样本检测,目标条带出现位置与预期一致;灵敏度检测结果表明,DNA检测下限可达1 ng·μL-1;挑选3位实验室人员进行茯苓真伪检测,结果相同且和预期一致,建立的茯苓PCR鉴定方法特异性良好,准确性高,重复性好.结论:PCR鉴定技术为茯苓的真伪鉴别提供了简便可靠、特异性良好,并且准确性高的鉴别方法.采用分子克隆技术可以成功保存茯苓标准对照品,测序结果准确可靠.

关键词：茯苓、内转录间隔区、聚合酶链式反应方法、改良十六烷基三甲基溴化铵、分子生物学鉴定

所属期刊栏目：43

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：吉林省科技创新中心建设项目;吉林省科技厅科技创新项目;吉林省科技厅科技创新项目

在线出版日期：2023-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：414-421