10.16155/j.0254-1793.2023.01.05
HPLC法结合LC-MS法测定硫酸鱼精蛋白含量及肽段鉴定
目的:建立了一种同时测定硫酸鱼精蛋白中主成分纯度和含量的HPLC方法,并采用LC-MS法对肽段氨基酸序列进行鉴定.方法:HPLC方法采用的色谱柱为ThermoHypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相A为0.1 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8),流动相B为乙腈-0.1 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至1.8)(6.5:93.5),梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温55℃,紫外检测波长为214 nm,进样量100 μL.LC-MS法先采用馏分收集方式对各肽段进行提取富集,然后液质联用采用 Waters ACQUITY UPLC Peptide BEH C18 色谱柱(15 cm×0.21 cm,1.7 μm),流速为 0.2 mL·min-1,流动相A为0.1％甲酸溶液,流动相B为5％乙腈-0.1％甲酸溶液,梯度洗脱;Thermo Q-Exactive Plus,ESI离子源,阳离子检测模式,雾化电压为3 800 V,离子传输管温度为300℃,扫描范围m/z 200～2 000.结果:建立的HPLC法对2家企业提供的鲑科和鲱科来源的硫酸鱼精蛋白进行有效鉴别,鲑科来源硫酸鱼精蛋白含量测定结果为94.4％～96.2％,鲱科来源硫酸鱼精蛋白含量测定结果为88.4％～92.3％;鲑科来源硫酸鱼精蛋白纯度测定结果均为96％,鲱科来源硫酸鱼精蛋白纯度测定结果为66％～69％.在Uniprot蛋白数据库检索并获取鱼精蛋白目标肽段的氨基酸序列,采用ThermoBioPharmaFinder v3.0软件对图谱碎片离子峰和目标序列理论碎片离子进行匹配,得到鲑科来源4条主要肽段和鲱科来源3条主要肽段的氨基酸序列鉴定结果.结论:本文建立的HPLC方法可用于硫酸鱼精蛋白的鉴别、含量测定和纯度分析,LC-MS法可对鲑科和鲱科来源的硫酸鱼精蛋白肽段序列进行鉴定.
硫酸鱼精蛋白、高效液相色谱法、鉴别、纯度、含量测定、液质联用法LC-MS、肽段鉴定、质量控制
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R917(药物基础科学)
国家药典委员会课题2016-279;2016-280
2023-03-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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