重组双特异性抗体药物电荷异质性分析iCIEF方法新载体基质研究及验证

摘要：

目的:建立应用成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)法测定重组双特异性抗体(bsAb)电荷异质性的新载体基质的方法.方法:首先,对2种bsAbs在传统的载体基质甲基纤维素(MC)/羟丙甲基纤维素(HPMC)与新的甘油基质中的电荷异构体分离效果进行对比;然后,对甘油基质方法进行进一步优化,以研究甘油浓度、两性电解质种类及其终浓度、不同pH范围两性电解质的组合方式等对电荷异构体分离效果的影响,获得基于甘油基质最佳的分析条件;最后,应用甘油基质的最优分离条件进行了 iCIEF方法验证,包括精密度、准确度、线性范围及稳定性指示性验证等.结果:2种bsAbs在甘油基质中的电荷异构体的分离效果均优于HPMC载体基质,且方法的稳健性较好;方法验证结果显示:对于bsAb 1,酸区、主峰、碱区峰峰面积百分比的RSD均小于2.0％,精密度良好;在蛋白终浓度0.10～0.30 mg·mL-1范围内,主峰平均峰面积与蛋白浓度回归曲线r大于0.99,线性良好;每个浓度点的回收率均在95％～105％范围内,准确度良好.对于bsAb 2,酸区、主峰峰面积百分比RSD均小于2.0％,碱区峰面积百分比小于20.0％,精密度良好.该方法能够指示出产品电荷异构体的含量变化情况,可用于产品的质控.结论:使用甘油作为新的载体基质代替传统的HPMC载体基质进行iCIEF分析,具有分离度较好,稳定性强,准确性高,成本低等优势,解决了结构较复杂的重组双特异性抗体类药物在传统MC/HPMC载体基质中无法实现电荷异构体良好分离的难题,尤其适用于复杂的双特异抗体类药物的产品质量评估及质量控制.

关键词：双特异性抗体、电荷异质性、甘油、载体基质、成像毛细管等电聚焦电泳(iCIEF)、方法验证

所属期刊栏目：42

分类号：R917(药物基础科学)

在线出版日期：2023-02-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1927-1935