基于响应面法优化紫草药材的基因组DNA提取条件

摘要：

目的:基于响应面法对紫草药材基因组DNA的提取条件进行优化.方法:考察植物基因组DNA提取试剂盒中不同操作步骤反应时间对紫草药材基因组DNA提取效率与质量的影响;基于响应面法对紫草药材基因组DNA提取过程中取样量、乙醇处理、裂解时间3个条件进行优化;对优化条件进行验证;通过调整PCR扩增体系中的引物浓度,而对紫草药材基因组DNA的PCR扩增体系进行优化.结果:通过考察植物基因组DNA提取试剂盒中不同操作步骤反应时间对紫草药材基因组DNA提取效率与质量的影响,发现不同反应时间的影响不明显;基于响应面法,确定紫草药材基因组DNA的最佳提取条件为取样量100 mg、裂解过夜(12～15 h)、以100％乙醇浸泡样品24 h进行前处理;通过对紫草市场样品100批进行验证,PCR扩增成功率为89％;确定紫草药材基因组DNA的PCR体系中最佳引物浓度为0.10 μmol·L-1,当所得基因组DNA仍不能正常扩增时,可将DNA稀释10倍.结论:通过对紫草药材的基因组DNA提取条件和PCR扩增条件进行优化,大大提高了紫草药材基因组DNA的提取与扩增效率,为紫草药材的分子生物学鉴定提供支撑,同时也为其他中药民族药品种的基因组DNA提取条件优化提供了可以参考的依据.

关键词：紫草、响应面法、优化、聚合酶链式反应(PCR)、内部转录间隔区2(ITS2)

所属期刊栏目：42

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：中国食品药品检定研究院学科带头人培养基金2021X4

在线出版日期：2022-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1345-1353