新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素修饰位点研究

摘要：

目的:建立新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)修饰位点的研究方法,为该类新型修饰技术产物的质量评价提供依据.方法:采用MALDI-TOF质谱分析修饰产物中聚乙二醇(PEG)的修饰个数及修饰肽段的质量数;采用LC-Q-TOF质谱分析修饰位点,分析色谱柱为UPLC色谱柱(Pro-tein ACQUITY BEH C4 Column,150 mm×2.1 mm,1.7 μm,300?),以0.1％甲酸水溶液-0.1％甲酸乙腈溶液为流动相,进行梯度洗脱,柱温为40℃.质谱数据采集条件为MSE模式,一级质谱能量4 eV,二级碎裂电压30～55 eV.结果:修饰蛋白中PEG的平均相对分子质量为30 000,并且每个PEG-rhGH分子中仅存在1个PEG修饰;原型蛋白重组人生长激素中第134位精氨酸被替换为赖氨酸,且该赖氨酸的ε-氨基与连接子HOOC-O-CH2-CH2-N3中的羧基端共价结合,连接子另一端的叠氮基团与活化后的PEG偶联后生成修饰产物.结论:联合运用多种质谱技术,通过比对人生长激素国家对照品、原型蛋白与修饰蛋白的酶切肽图谱及对特定肽段的一级、二级碎片的分子量分析,可以确定新型定点修饰的PEG-rhGH的修饰位点.

关键词：聚乙二醇化重组人生长激素、聚乙二醇化、重组人生长激素、定点修饰、基质辅助及激光解吸-飞行时间质谱、四极杆-飞行时间质谱

所属期刊栏目：42

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家科技重大专项2019ZX09739001-003

在线出版日期：2022-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：86-93