基于报告基因的重组人促卵泡激素Fc融合蛋白生物学活性测定方法研究

摘要：

目的:利用转基因细胞法建立重组人促卵泡激素Fc融合蛋白(rhFSH-Fc)生物学活性检测方法.方法:利用CHO-K1-FSHR-CRE-Luc转基因细胞,按一定细胞密度种板,培养16～20 h后吸弃培养基,将rhFSH-Fc倍比稀释加入细胞板,药物作用一段时间后加入荧光素酶检测试剂,通过荧光素酶检测系统对rhFSH-Fc进行生物性活性检测,并对各试验条件参数优化及进行方法学验证.结果:rhFSH-Fc在该方法中存在量效关系且符合四参数曲线方程,R2大于0.99;方法优化后确定细胞种板密度为5×105个·mL-1,rhFSH-Fc稀释起始浓度为750 ng·mL-1,1∶5倍的稀释倍数,诱导时间为4 h,样品稀释液为DMEM/F12K+10％FBS.该方法具有良好的专属性,9次独立日间、日内精密度检测RSD均小于5％,5个不同稀释组回收率样本经6次测定,相对效价分别为(51±2.00)％、(78±2.05)％、(94±2.23)％、(124±3.46)％、(141±4.45)％;对应回收率平均值分别为(101±3.94)％、(104±3.00)％、(94±2.24)％、(99±2.68)％、(94±3.03)％,RSD均小于4％.结论:本研究利用转基因细胞成功建立rhFSH-Fc生物学活性测定方法,该方法操作简便,重复性好,准确性高,可用于rhFSH-Fc产品的常规检测.

关键词：重组人促卵泡激素Fc融合蛋白、长效重组蛋白药物、报告基因法、环磷酸腺苷、CHO-K1-FSHR-CRE-Luc转基因细胞、生物学活性测定、方法学验证、信号通路

所属期刊栏目：42

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家科技重大专项2018ZX09101001-003-004

在线出版日期：2022-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：60-67