注射剂科氏葡萄球菌污染的鉴定和同源性分析方法研究

摘要：

目的:采用多种常用微生物鉴定方法和同源性分析方法,对某制药企业注射剂无菌检查试验中分离的微生物污染菌A1进行来源分析,为药品生产企业完善微生物监控体系,实现生产和检验过程的微生物控制提供技术参考.方法:使用VITEK 2微生物生化鉴定仪对A1和本次污染调查采集的78株菌进行初步鉴定,选择与A1同属的菌,分别采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、16S rRNA基因序列分析、核糖体分型(Ribotyping)、全基因组测序(WGS)等方法进行鉴定和同源性分析,同源性分析结果用PFGE进行了验证.结果:除MALDI-TOF MS法的部分鉴定结果外,几种方法的微生物鉴定结果完全相同;上述方法的同源性分析结果均为A1溯源自无菌检验使用的无菌隔离器内部仪器表面采集菌株A2(16S rRNA基因序列分析本次仅溯源至亚种),该结果得到了PFGE证实;不同方法在种的集群之间的亲缘关系划分有所不同.结论:微生物污染溯源的流程一般包括以下3步:首先采用生化鉴定法初步确定污染菌的种;其次从污染调查采集菌株和环境菌库中选择与污染菌同种的微生物;然后,使用16S rRNA基因序列分析、核糖体分型、全基因组测序等方法进行微生物鉴定和同源性分析.采用16S rRNA基因序列分析时,必须进行多相鉴定以便准确溯源,才能有效实施纠正与预防措施.

关键词：微生物污染;鉴定;同源性分析;葡萄球菌;傅里叶变换红外光谱(FTIR);基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS);16S rRNA基因序列分析;核糖体分型;全基因组测序(WGS);脉冲场凝胶电泳(PFGE);微生物污染溯源流程

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：四川省科技基础条件平台项目;成都市科技惠民技术研发项目;广州市科学研究计划

在线出版日期：2021-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1764-1774