CESI-MS/MS和NanoLC-MS/MS技术对促红细胞生成素中糖肽的分析

摘要：

目的:使用无鞘液毛细管电泳-质谱联用(CESI-MS/MS )和纳升液相色谱-质谱联用(NanoLC-MS/MS )2种方法,对高糖基化蛋白促红细胞生成素(EPO)的糖肽进行分析,并对2种方法的分析结果进行对比.方法:以EPO为研究对象,还原烷基化后用胰蛋白酶进行酶切,酶切得到的肽段利用CESI-MS/MS 和NanoLC-MS/MS检测方法进行分离鉴定.CESI-MS/MS分析方法:采用熔融的石英毛细管,以10％醋酸水溶液为背景电解质,在34.5 kPa压力下进样60 s,分离电压为30 kV,同时施加正向压力6.9 kPa;离子源温度为50℃,喷雾电压为1 650 V,MS扫描范围为m/z 350～1 250,MS/MS扫描范围为m/z 100～1 500.NanoLC-MS/MS分析方法:采用YMC C18色谱柱,以含0.1％甲酸的水溶液(A)-含0.1％甲酸的乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速5 μL·min-1;离子源温度300℃,喷雾电压为+5 500 V,MS扫描范围为m/z 350～1 250,MS/MS扫描范围为m/z 100～1 500.将采集到的质谱数据导入到软件BiopharmaViewTM3.0中进行搜库检索,对糖肽进行鉴定.结果:采用CESI-MS/MS方法可以单独鉴定到32条糖肽,采用NanoLC-MS/MS方法可以单独鉴定到40条糖肽;通过2种方法可以共鉴定到84条糖肽,共涉及56种糖型.对比2种方法的结果,发现对于EPO糖肽的分析,CESI-MS/MS方法可以鉴定到更多的含唾液酸的糖肽,并表现了更优异的分离效果.此外,CESI-MS/MS方法鉴定出的糖肽分子量范围更宽,可以有效分析NanoLC-MS/MS方法中未鉴定到的高分子量糖肽.结论:在糖蛋白的分析中,通过糖肽水平的分离和鉴定,可以获得糖基位点和糖基序列的信息.CESI-MS/MS方法和NanoLC-MS/MS方法提供了互补的分析结果,其联合使用可鉴定出更多种类的糖肽,为糖蛋白的研究中糖肽水平的分析提供了更全面的解决方案.

关键词：促红细胞生成素、糖肽、糖蛋白激素、糖基化修饰、无鞘液毛细管电泳-质谱联用、纳升液相色谱-质谱联用

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家药典委员会药品标准制修订研究课题2019S008

在线出版日期：2021-03-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：79-88