10.16155/j.0254-1793.2020.04.06
抗EpCAM+CD3双特异性抗体关键表征解析
目的:解析抗EpCAM+CD3双特异性抗体(BsAb)的关键表征.方法:以抗EpCAM+CD3双特异性抗体为研究对象,超高效液相色谱串联质谱联用技术(LC-MS/MS)检测相对分子质量、肽图(氨基酸序列)、N-糖基化位点、糖型及各糖型含量、二硫键位点;表面等离子体共振(SPR)技术测定其与上皮细胞粘附因子(EpCAM)、白细胞分化簇3(CD3)和Fc受体(FcRs)的亲和力.结果:含糖基化的完整抗体、轻链、重链和单链的相对分子质量分别为128 521.78、24117.83、50 808.85和53 585.87;不合糖完整抗体、轻链、重链和单链的相对分子质量分别为125633.30、24117.85、49 364.53和52 141.30;对象BsAb氨基酸序列与理论序列一致;N-糖基化位点位于重链Asn300和单链Asn326;N-连接寡糖的糖型包括以岩藻糖化的双天线复杂肛糖(GOF占全部糖型含量77.10%)为主的11种糖型;对象BsAb内含13对二硫键;单链第Cys105位和第Cys249为游离巯基;SPR测定结果显示:对象BsAb与EpCAM、CD3的亲和力分别为2.71×10-8和5.94×10-7 mol·L-1,与FcγR Ⅰ、Fc γRⅡa、FcγRⅡb、Fc γRⅢa、Fc γ RⅢb和FcRn的亲和力分别为2.89×10-8、8.85× 10-7、7.94×10-6、3.69×10-7、2.73×10-6和8.77×10-7 mol· L-1.结论:采用LC-MS/MS和SPR技术可有效解析抗EpCAM+CD3 BsAb的关键表征,为其质量控制和产品放行提供依据.
双特异性抗体(BsAb)、抗EpCAM+CD3、表征、亲和力、超高效液相色谱串联质谱联用技术、表面等离子体共振
40
R917(药物基础科学)
重大新药创制"科技重大专项2018ZX09101-001-003
2020-06-17(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共13页
620-632