U-2OS细胞/CCK-8法测定1型单纯疱疹病毒溶瘤活性

摘要：

目的:建立U-2 OS细胞/CCK-8比色法,用于测定1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)溶瘤活性.方法:选择3株对HSV-1敏感的的细胞株,在细胞培养板上以梯度浓度的HSV-1感染一定时间后,加入CCK-8进行显色,用酶标仪检测后采用四参数曲线法进行量效关系拟合.在选择出量效关系最好的细胞株基础上,对方法的各项实验条件进行优化,并采用活性测定标准品对结果进行校正分析.对建立的方法初步验证准确性和精密度,并用上述方法对3批样品的溶瘤活性进行检测.结果:优化后的实验采用U-2 OS细胞株,1∶4的样品系列稀释比例,5×104 PFU· mL-1的样品系列稀释初始浓度,每孔2.5×104个细胞的铺板数量,72 h感染时间和4 h CCK-8试剂反应时间等条件进行样品测定,得到的四参数方程拟合的量效关系曲线R2大于0.99,信噪比较高,初步验证结果显示该方法的回收率为113.4％,日间精密度分析的几何变异系数(GCV)为21.8％.3批测试样品的溶瘤活性分别为3.52×103、3.93×104和1.61×105 U·mL-1.结论:建立的U-2 OS细胞/CCK-8法可用于以HSV-1为载体的基因治疗药物溶瘤活性测定.

关键词：1型单纯疱疹病毒(HSV-1)、溶瘤活性、标准品校正、量效关系拟合、四参数曲线法、U-2 OS细胞、CCK-8显色法

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家科技重大专项课题资助项目2018ZX09733002-005

在线出版日期：2020-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：31-36