CE-LIF方法对重组人促红细胞生成素中N-寡糖的快速分析

摘要：

目的:建立毛细管电泳-激光诱导荧光检测(CE-LIF)的方法对重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)的N-寡糖进行快速分析.方法:以N-糖苷酶酶切rhEPO样品,采用磁珠辅助法收集酶切下来的N-寡糖,以APTS对酶切下来的N-寡糖进行荧光标记,利用CE-LIF实现分离检测,通过GU数据库进行糖型鉴定.CE-LIF条件:采用未涂层熔融石英毛细管(有效长度20 cm,总长度30 cm,内径50 μm),电迁移进样,电压设为-2 kV,进样时间2s;毛细管分离温度设为25℃,毛细管分离电压为-30 kV,分离时间5.5 min;LIF检测器的激发波长及发射波长分别为488 nm和520 nm.结果:新建方法在60 min内完成样品前处理,5 min内完成分离分析检测;FA2BG2S2、FA2(3)G1S1和A2B3个峰的迁移时间的RSD均小于0.2％,校正峰面积百分比RSD均小于2.6％(n=5).结论:本研究建立的CE-LIF快速糖分析法高效快速,重复性好,可对糖型进行实时鉴定,适用于rhEPO制品的N-寡糖分析.

关键词：促红细胞生成素、N-糖基化、重组蛋白、毛细管电泳-激光诱导荧光检测、GU数据库

所属期刊栏目：39

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家“重大新药创制”科技重大专项资助项目2015ZX09501008-001

在线出版日期：2019-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1852-1857