人乳头瘤病毒18型L1抗原的肽图特征峰分析

摘要：

目的:比较分析不同氨基酸序列人乳头瘤病毒(HPV) 18型L1抗原的肽图,收集差异特征峰肽段,利用质谱方法对其进行鉴别.方法:将HPV18型L1抗原用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过RP-HPLC法分离肽段,得到HPV18型L1抗原肽图;用Megalign软件比较不同来源的L1抗原的氨基酸序列差异,分析不同HPV18型L1抗原的肽图特征峰,收集差异特征峰;HPLC色谱条件:采用C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.1％三氟乙酸-水为流动相A,0.1％三氟乙酸-乙腈为流动相B,梯度洗脱(0～10 min,100％A;10～80 min,100％A→30％A;80～91 min,30％A→100％A),流速1.0mL· min-1,柱温30℃,检测波长214 nm,进样量100 μL.再运用UPLC-MS/MS技术,采用电喷雾离子源(ESI),正离子全扫描检测模式,喷雾电压2 kV,毛细管温度300℃,对差异特征峰进行鉴别.结果:5个公司生产的L1抗原平行6次重复检测,各共有峰保留时间的RSD最大值范围为0.24％～0.49％,表明肽图分析方法重复性良好.对5个公司的3批次抗原进行检测,主要峰保留时间的最大RSD范围为0.20％～0.74％,表明批间一致性良好.比较发现5个不同公司生产的HPV疫苗18型L1抗原的液相肽图有6个差异特征峰(1～6号),分别对其进行质谱鉴定,结合氨基酸序列的比对分析,发现5个特征峰由氨基酸差异引起:487～496位氨基酸的缺失将导致1号特征峰的缺失;88位氨基酸N和T的相互转变导致2、3号特征峰相互转变;494位氨基酸S和A的相互转变导致1、4号特征峰相互转变;5号特征峰为4号特征峰胰蛋白酶酶切不完全出现的;6号峰为非特异峰.表明不同公司生产的HPV18型L1抗原具有各自的特征峰.结论:本研究建立的HPLC-MS/MS肽图特征峰分析方法,可应用于不同企业生产的18型的HPV L1抗原的鉴别和质量控制,进一步表明了肽图在疫苗原液质量控制中的重要意义.

关键词：人乳头瘤病毒(HPV)、肽图、L1抗原、疫苗、液相色谱-质谱联用、特征峰、鉴别

所属期刊栏目：39

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：重大新药创制"科技重大专项2018ZX09101001

在线出版日期：2019-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1836-1843