动物源性生物材料体外淋巴细胞增殖试验方法的建立

摘要：

目的:建立可用于评价动物源性生物材料细胞免疫的体外淋巴细胞增殖试验方法.方法:采用C57小鼠脾脏淋巴细胞,通过淋巴细胞数量、阳性对照剂(刀豆蛋白A,Con A)浓度和培养时间等条件筛选,用CCK8试剂检测细胞增殖率,初步优化体外淋巴细胞增殖试验方法.采用牛心包组织(原材料)的浸提液和匀浆液,作为抗原特异性的阳性对照组考察样品前处理方式对试验体系的影响,并用流式细胞仪分析增殖后的淋巴细胞亚型百分比,考察样品制备方式对淋巴细胞亚型增殖影响的差异.结果:本试验中小鼠脾淋巴细胞体外增殖试验条件确定为每孔接种6×105个淋巴细胞,阳性对照孔Con A浓度为2.5 μg· mL-1,培养时间为3d.牛心包浸提液和匀浆液的淋巴细胞增殖率均约为细胞对照组的2倍,两者的淋巴细胞亚型百分比变化不同于Con A组,未出现T细胞、CD4 T细胞、CD8 T细胞百分比的增加.浸提液组与匀浆液组的活化NK细胞和NKT细胞百分比与对照组相比均明显升高,但浸提液组的升高幅度数倍高于匀浆液组,且仅浸提液组NK细胞百分比与对照相比出现了明显倍增.结论:本研究建立了以动物组织(原材料)为抗原特异性阳性对照的体外淋巴细胞增殖试验方法.动物组织(原材料)浸提和匀浆样品均可以产生淋巴细胞增殖阳性结果,其促进淋巴细胞增殖的机理(亚型分类)不同于ConA等有丝分裂原,提示使用作为动物组织(原材料)阳性对照更能反映试验体系的敏感性.

关键词：动物组织(原材料)、动物源性生物材料、淋巴细胞增殖试验、抗原特异性、流式细胞术

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家重点研发计划;国家重点研发计划

在线出版日期：2019-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1337-1346