重组人乙酰胆碱酯酶体外表达制备及其相关小分子活性筛选

摘要：

目的:建立重组人乙酰胆碱酯酶(rhAChE)抑制剂体外筛选模型,并应用该模型对中药单体进行抑制剂的初步筛选.方法:运用pCMV-AChE表达质粒转染HEK293细胞,通过DEAE-Sepharose FF柱纯化酶液,获得更高纯度和活性的纯化酶,并建立其活性检测方法,同时结合SDS-PAGE及Western blot验证模型成功与否;以AChE的可逆性抑制剂多奈哌齐为阳性药,运用该模型探究小檗碱、血根碱和蛇根碱对AChE的影响.结果:纯化液比活力为15.93 U·mg-1,纯化倍数为9.63,酶活回收率为56％;Western blot结果显示在68×103g·mol-1附近出现明显的rhAChE的单一条带;测得纯化后rhAChE的IC50为5.0 nmol· L-1,明显低于纯化前(14 nmol·L-1);3个不同的化合物对rhAChE分别表现出不同程度的抑制作用,其中小檗碱的IC50接近多奈哌齐.结论:SDS-PAGE、Western blot以及多奈哌齐的阳性结果显示利用pCMV-AChE转染的HEK293细胞成功构建rhAChE抑制剂体外筛选模型,并成功运用于中药单体药物的初筛.

关键词：重组人乙酰胆碱酯酶(rhAChE)、阿兹海默症、HEK293细胞、抑制剂、小檗碱、筛选模型

所属期刊栏目：39

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：浙江省自然科学基金;浙江农林大学科研发展基金

在线出版日期：2019-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：386-392