基于报告基因的抗HER2单克隆抗体ADCC生物学活性测定方法的建立及应用

摘要：

目的:利用转基因细胞法建立抗人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)单抗的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)生物学活性检测方法.方法:利用Jurkat-hFcγRⅢa-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,SKBR3细胞系作为靶细胞,通过荧光素酶检测系统(BioGloTM Luciferase Assay system)进行抗HER2单抗的ADCC生物学活性检测,同时对试验条件进行优化及方法学验证,并将该检测方法用于不同类型的抗HER2单抗ADCC效应的评价.结果:抗HER2单抗在该方法中存在量效关系,且符合四参数方程式:γ=(A-D)/[1+(x/C)B]+D,方法经优化后确定靶细胞为SKBR3细胞,抗体稀释起始工作质量浓度为4 000 ng· mL-1,1∶4倍的稀释倍数,效靶比为15∶1,诱导时间为20 h.该方法具有良好的专属性;3次独立检测的板间、日间最大诱导倍数(fold of induction,FI)及半数有效浓度(concentration for 50％ of maximal effect,EC50)的RSD均小于10％;4个不同稀释组回收率样本经3次测定,相对效价分别为(46.27±2.01)％、(71.18±1.55)％、(133.17±9.91)％以及(166.55±15.73)％;对应的回收率分别为(92.53±4.01)％、(94.91±2.07)％、(106.54±7.93)％、(111.04±10.48),RSD均小于10％,且该方法也适用于不同变性程度及各类抗HER2单抗的ADCC效应评价.结论:本研究利用转基因细胞法成功建立抗HER2单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、重复性好,准确性高,可作为抗HER2单抗ADCC生物学活性的常规检测方法.

关键词：抗人表皮生长因子受体2单克隆抗体、抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用、生物学活性、荧光素酶检测系统、报告基因

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：重大新药创制"科技重大专项No.2018ZX09736016-007

在线出版日期：2019-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：51-61