均相时间分辨荧光法测定抗PD-1/PD-L1单抗药物活性

摘要：

目的:探索并建立一种均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)检测方法,用于快速、灵敏、稳定检测单克隆抗体的活性.方法:将检测试剂、待检样品加入96半孔板,室温振荡孵育3h后在酶标仪上读取荧光信号值,用软件对信号值进行四参数曲线拟和,根据四参数方程计算单抗的相对活性;同时对该方法进行验证.结果:本文构建的检测方法呈典型的反S型剂量效应曲线,且反应缓冲液中添加0.4 mol· L-1氟化钾可提高荧光响应值.对该方法进行验证,专属性强,只与抗PD-1/PD-L1单抗发生反应;2名不同分析人员重复检测6次,相对效价范围为85％～ 117％,总RSD为13％;准确性良好,不同浓度供试品溶液回收率均在80％～120％范围内;理论相对活性与实际测得相对活性线性良好,相关系数在0.99以上,斜率接近1.0,符合方法验证要求.结论:通过对HTRF检测条件的摸索及验证,建立了一种新型测定单抗活性的方法,且该方法快速简便,可用于单抗的前期筛选或后期活性检测.

关键词：均相时间分辨荧光、单克隆抗体药物、活性、程序性死亡因子、程序性死亡因子受体、氟化钾

所属期刊栏目：39

分类号：R917(药物基础科学)

在线出版日期：2019-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：45-50