重组人粒细胞刺激因子的N端氨基酸序列异质性分析

摘要：

目的:分析重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)的N端异质性.方法:采用反相超高效液相色谱法分离rhG-CSF中N端不一致的各组分;色谱条件:采用Waters BEH 300 C4 (2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱,以0.1％三氟乙酸水溶液(A)-0.1％三氟乙酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL· min-1.分别收集各组分并冷冻干燥,采用N端测序仪测定各组分的N端氨基酸序列;液质联用测定rhG-CSF的相对分子质量,对N端测序结果进行验证质谱仪采用Waters公司Xevo G2-S质谱仪,正离子电喷雾离子源,毛细管电压3.0 kV,锥孔电压40 V,去溶剂气体温度350℃,去溶剂气体流速800 L· h-1,扫描范围(m/z)500～3 000.结果:色谱分离得到3个组分;N端氨基酸序列测定结果显示,3个组分分别为rhG-CSF主成分及2个N端异质性相关蛋白;质谱相对分子质量测定结果与N端测序结果一致.结论:应用色谱法及质谱法可对rhG-CSF中的N端异质性相关蛋白进行分析检测,检测结果可为国产rhG-CSF制品的质量控制和标准提升提供参考和数据支持.

关键词：重组人粒细胞刺激因子、N端异质性、相关蛋白、N端氨基酸序列、反相超高效液相色谱、质谱

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：药品医疗器械审评审批制度改革专项课题ZG2017-3-02;十三五科技重大专项课题“生物类似药质量相似性评价体系建设研究”2015ZX09501008

在线出版日期：2019-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1887-1892