葡萄球菌属不同靶基因序列种水平鉴定能力的比较评价研究

摘要：

目的:比较评价靶基因16S rRNA、tufA、femA、rpoB和gap序列对葡萄球菌种水平的鉴定能力.方法:选择60株菌种鉴定明确的葡萄球菌(涵盖18个种),比较评价16S rRNA基因序列及VITEK 2全自动微生物生化鉴定系统对常见葡萄球菌鉴定的准确性;采用PCR方法特异扩增60株菌tufA、femA、rpoB和gap的基因序列,并对阳性扩增产物进行核酸测序,利用Mega 7.0和DNASP 5.0软件分析靶基因序列多样性,通过序列聚类关系分析,进一步评价不同靶基因序列对葡萄球菌种水平的分子鉴定能力.结果:16S rRNA基因序列比对不能有效区分山羊葡萄球菌和头状葡萄球菌,而VITEK方法则将巴氏葡萄球菌错误鉴定为沃氏葡萄球菌.序列多样性分析表明,尽管靶基因tufA、femA、rpoB和gap序列比16S rRNA基因序列多样性更强,但基于tufA、femA、rpoB和gap序列的聚类分析在种水平仍会错误鉴定部分葡萄球菌,如表皮葡萄球菌、头状葡萄球菌、腐生葡萄球菌和科氏葡萄球菌等.进一步评价16S rRNA基因序列分别与靶基因tufA、femA、rpoB和gap的串联序列对葡萄球菌种水平的鉴定能力,结果表明只有靶基因emA与16S rRNA基因的串联组合能够实现对18种葡萄球菌的准确鉴定,而其他靶基因与16S rRNA基因的串联组合对于葡萄球菌种水平的鉴定能力没有明显改善.结论:基于单个靶基因的序列分析会造成部分葡萄球菌种水平的错误鉴定,而基于16S rRNA与femA基因的串联序列分析则能够显著提高对葡萄球菌种水平鉴定的准确性.

关键词：凝固酶葡萄球菌、种水平鉴定、核酸序列、16S rRNA、看家基因、微生物污染

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：2015年国家药典委员会标准提高研究项目:《分子生物学技术用于药品质量控制标准核酸序列数据库的建立、分子生物学技术用于药品质量控制标准化技术指导原则的制定》;上海市食品药品检验所重大项目SKT-2016-09

在线出版日期：2018-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：672-679