定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质病毒突变的荧光MAPREC法的建立和应用

摘要：

目的:使用荧光标记代替同位素标记,建立定量检测Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎病毒472位U到C突变比例的MAPREC(mutant analysis by PCR and restriction enzyme cleavage)法.方法:提取病毒样品RNA,反转录合成cDNA后进行非对称PCR反应以生成单链DNA扩增产物,之后采用荧光标记引物进行扩增,合成双链产物,以突变位点敏感的限制性内切酶作用后电泳分离,并分析样品的突变比例.结果:采用建立的方法对4个国际标准品进行检测,100％ DNA突变标准品、IS DNA标准品、LMVR标准品以及HMVR标准品的标示值分别为100％、0.9％、0.7％、1.1％,检测结果分别为95.59％、0.84％、0.68％、1.07％,与其标示值一致性良好,并且不同实验间RSD均小于15％.检测9个批次样品,结果突变率均小于1％,符合WHO要求.结论:初步建立了基于荧光素标记的MAPREC方法,可以代替同位素法进行病毒突变的定量检测.

关键词：MAPREC、脊髓灰质炎病毒、疫苗、荧光标记、突变率

所属期刊栏目：38

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家国际科技合作专项基金;国家科技重大专项

在线出版日期：2018-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：288-292