重组人促红素理化对照品的质量评价

摘要：

目的:建立重组人促红细胞生成素的理化对照品的质量标准,对8家企业的促红素理化对照品进行质量评价.方法:用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性,使用LC-MS绘制质量肽图谱.色谱条件:采用BEH300 C4色谱柱(2.1 mm×50mm,3.5 μm),流动相为水(A)-乙腈(B)-1％甲酸水溶液(C),梯度洗脱(0～60 min,1％B→60％B,10％C;60～61 min,60％B→90％B,10％C;61～75 min,90％B→÷1％B,10％C),流速0.2 mL· min-1,柱温为40℃,样品保存温度为10℃,上样量5 μL;质谱条件:MSE模式采集数据,毛细管电压3 000 V,Cone电压40 V,去溶剂气体温度350℃,源温120℃,去溶剂气体流速800 L· h-1,扫描范围m/z 50～2 000.确证一级结构,二硫键链接方式及糖基化位点;绘制N糖图谱,分析寡糖结构;用毛细管区带电泳分析异构体.采用压力进样3.45 kPa;进样时间10 s,分离电压15.4 kV,分离时间80 ain,检测波长214 nm.其余检测项目按中国药典2015年版三部方法进行.结果:建立的方法适合促红素理化对照品的检测,各样品的氨基酸序列均与理论一致;二硫键连接方式均为Cys7-Cys161、Cys29-Cys33;O-糖基化位点均为Ser126,Ⅳ-糖基化位点均为Asn24、Asn38、Asn83;各样品的糖基修饰方式存在差异,不同糖型的相对比例不一致.等电聚焦结果为5～8条电荷异构体条带,不同样品的电荷异构体的组成比例有所差异,蛋白质含量、体内比活性、电泳纯度、液相纯度、等电聚焦、唾液酸含量、N端氨基酸序列、肽图结果均符合拟定的理化对照品质量标准.结论:建立了理化对照品的质量标准,不同企业的理化对照品质量总体稳定一致,但糖基化水平存在一定差异,分析比较了不同企业的促红素理化对照品在生物比活性,糖基化,异构体分布、电荷异质性等方面的差异.

关键词：重组人促红素、理化对照品、一级结构确证、异构体分析、质量标准、质量评价

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：十三五科技重大专项课题“生物类似药质量相似性评价体系建设研究2015ZX09501008”资助项目

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1117-1126