野艾蒿中4种黄酮类化合物对HepG2细胞AMPK和LPIN1表达的影响

摘要：

目的:研究野艾蒿(Artemisia lavandulaefolia DC.)中木犀草素、柚皮素、槲皮素、芹菜素4种黄酮类单体化合物对HepG2细胞的腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和磷脂酸磷酸水解酶1(LPIN1)表达的影响,从分子水平探明其降血脂的有效成分.方法:以HepG2细胞为研究对象,用细胞毒性实验(MTT法)观察野艾蒿中4种单体黄酮类化合物在不同用药时间和浓度时对HepG2细胞增殖的影响,并从中筛选出合适的用药浓度和作用时间.将实验分为对照组和药物组,根据筛选出的用药时间和浓度对培养细胞进行药物干预,分别抽提对照组和实验组细胞总RNA与总蛋白,实时荧光定量PCR检测LPIN1、AMPK α1和AMPKα2 mRNA表达情况,蛋白质印迹法(Western blot法)检测LPIN1、AMPK α1、AMPKα2和p-AMPK蛋白表达情况.结果:(1)4种黄酮类单体化合物均可不同程度抑制HepG2细胞的增殖,并在用药质量浓度0.01 mg·mL-1,作用时间24 h(药物对细胞的抑制率在15％～25％)为最适合作用条件.(2)实时荧光定量PCR检测结果显示,药物组AMPKα1mRNA表达与对照组比较无显著差异(P＞0.05);药物组AMPKα2 mRNA表达与对照组比较,柚皮素、槲皮素有统计学意义(P＜0.05),且表达水平升高;LPIN1 mRNA表达中,药物组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01),且表达量均显著降低.(3)Western blot结果显示,药物组AMPKα1蛋白表达与对照组比较,均无显著性差异(P＞0.05);AMPKα2蛋白表达中,药物组均有显著性差异(P＜0.05),且表达量升高;LPIN1蛋白表达中,药物组与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01),且表达量均降低;p-AMPK蛋白表达均有显著性差异(P＜0.01),且表达水平升高,提示野艾蒿乙酸乙酯提取的黄酮类化合物可通过磷酸化使AMPK活化.结论:(1)野艾蒿乙酸乙酯提取的4种黄酮类单体化合物可不同程度抑制HepG2细胞的增殖.(2)4种黄酮类单体化合物对HepG2细胞AMPKα1基因和蛋白表达均无明显作用;柚皮素和槲皮素可提高HepG2细胞内AMPK α2基因表达水平;4种黄酮类单体化合物均使AMPK α2蛋白表达量升高.同时均可显著降低HepG2细胞内LPIN1基因和蛋白表达水平;4种黄酮类单体化合物均可增加p-AMPK蛋白表达,提示均可激活AMPK磷酸化,使其活化.

关键词：野艾蒿、木犀草素、柚皮素、槲皮素、芹菜素、腺苷酸活化蛋白激酶、磷脂酸磷酸水解酶1、活性分析、细胞毒性分析、MTT法、实时荧光定量PCR

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：内蒙古自治区自然科学基金2013MS1173

在线出版日期：2017-03-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：74-82