报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性

摘要：

目的:建立报告基因法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA,Byetalog)生物学活性.方法:将胰高血糖素样肽-l受体(glucagon-likepeptide 1 receptor,GLP-1R)表达载体和cAMP反应元件(cAMP response element,CRE)报告基因载体共转染CHO-K1细胞,经加压筛选和单克隆分离培养获得稳定的单克隆细胞株;使用药物反应强的单克隆细胞株建立报告基因方法;对新建方法进行条件优化,并用优化的方法对促胰岛素分泌肽融合蛋白原液和成品进行生物学活性测定.结果:经加压筛选和单克隆分离培养后获得对Byetalog强反应性的细胞株CHOglpar/crec 14;新建方法剂量反应曲线符合四参数方程,R2砰大于0.99;对促胰岛素分泌肽融合蛋白的原液和成品分别测定3次,RSD值均低于5.0％,回收率在70％～130％之间.结论:报告基因法操作简便,重复性和准确性都较高,有望作为替代方法应用于促胰岛素分泌肽融合蛋白的生物学活性测定.

关键词：促胰岛素分泌肽融合蛋白、转基因细胞、报告基因法、CRE、GLP-1R、生物学活性测定

所属期刊栏目：36

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：重大新药创制"科技重大专项;中国博士后科学基金

在线出版日期：2016-04-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：426-431