贝伐珠单克隆抗体的HPLC定量检测方法的建立

摘要：

目的:建立HPLC-Protein A定量检测贝伐珠单抗的方法,用于该单抗生产过程的含量测定和质量控制.方法:采用Agilent Bio-Monolith Protein A Column(5.2 mm ×4.95 mm,0.10 mL)色谱柱,以PBS(含0.12 mol·L-氯化钠,pH 7.4)为流动相A,0.5 mol·L-1醋酸(pH 2.5)为流动相B.上样后用流动相A冲平,然后用流动相B进行洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为25℃,检测波长为280 nm.结果:以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,在0.078 ～ 10.0 mg·mL-1浓度范围内,R2 ＞0.999;回收率在98.32％ ～ 101.7％之间;批内精密度RSD≤1.5％;批间精密度RSD≤1.6％;检测限0.30 μg,定量限0.90 μg;在pH变化±0.2、流动相A中氯化钠浓度变化±10.0％、柱温变化±5.0℃、流速变化±20.0％条件下,峰面积相对标准差RSD为0.39％ ～ 1.0％;发酵液样品的保留时间为1.350 min,与对照品的保留时间一致;在18h内,同一批发酵液共检测27次,峰面积的RSD为0.44％.结论:方法学验证结果显示HPLC-Protein A法可以用于贝伐珠单抗生产过程的含量测定和质量控制.

关键词：贝伐珠单抗、单克隆抗体质量控制、Protein A色谱柱、金黄色葡萄球菌A蛋白、快速定量检测、高效液相色谱法、方法学验证

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：“重大新药创制”国家科技重大专项2011ZX09202-301-15

在线出版日期：2015-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1027-1031