2种定量PCR法与探针杂交法在检测重组白介素1受体拮抗剂中宿主DNA残留量的比较

摘要：

目的:建立Taqman探针技术的定量PCR方法,对大肠杆菌E.coli/BL21菌株生产的重组白介素1受体拮抗剂(rhIL-1ra)中的残留宿主DNA进行了定量分析,并与SYBR Green法和地高辛探针杂交法进行比较.方法:以BioRad Chromo 4荧光定量PCR仪为平台,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶基因,设计引物和Taqman探针,以纯化的宿主基因组DNA为标准品,对供试品中残留DNA进行定量.同时在重复性,精密度,检测限等方面与SYBR Green方法和地高辛探针杂交法进行比较.结果:本实验建立的Taqman探针法检测限为0.01 ng·mL-1,在0.01～1000 ng·mL-1区间同样具有良好的线性(r=0.997),回收率89.7％～136.0％.测定4批次供试品中残留DNA浓度为0.052、0.092、0.096、0.025 ng·mL-1.结论:Taq-man探针法与SYBR Green法检测灵敏度均达到0.01 ng· mL-1,在重复性与精密度方面效果一致,且均优于探针杂交方法.

关键词：大肠杆菌、定量PCR、宿主残留DNA、重组白介素1受体拮抗剂、质量控制、Taqmen探针

所属期刊栏目：34

分类号：R917(药物基础科学)

在线出版日期：2014-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：140-145