高效阴离子色谱-脉冲安培检测法测定脑膜炎球菌结合疫苗中A群多糖含量

摘要：

目的:采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(HPAEC-PAD)测定A群脑膜炎球菌多糖及脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗中6-磷酸甘露糖胺的含量,并对该方法进行验证,实现微量A群脑膜炎球菌多糖的定量检测.方法:A群脑膜炎球菌多糖酸水解处理后,经1H、13C NMR及COSY谱图分析,产物结构为6-磷酸甘露糖胺单体,然后进样CarboPac(R) PA10柱,氢氧化钠-醋酸钠梯度洗脱,脉冲安培检测.筛选样品的水解条件;对HPAEC-PAD法进行专属性、精密度及准确性验证,并进行初步应用.结果:确定样品的水解条件为2 mol·L-1三氟乙酸煮沸5h.载体蛋白破伤风类毒素对检测无干扰;在1～10 μg·mL-1范围内,标准曲线线性关系良好(r ＞0.999),加样回收率在95.73％ ～ 102.4％之间;试验内和试验间精密度试验结果RSD小于5％.HPAEC-PAD法测定疫苗原液的多糖含量与Chen法比色测定结果相当,成品疫苗的A群多糖含量测定符合《A、C群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》(每剂均≥10μg)和《A、C、W135、Y群脑膜炎球菌结合疫苗制造及检定规程草案》(每剂均≥4 μg).结论:HPAEC-PAD法专属性、精密度和准确性良好,可用于A群脑膜炎球菌多糖含量测定,尤其是脑膜炎球菌结合疫苗中A群多糖含量测定.

关键词：高效阴离子色谱-脉冲安培检测(HPAEC-PAD)、脑膜炎球菌结合疫苗、A群多糖含量、6-磷酸甘露糖胺、定量检测方法验证

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：重大新药创制科技重大专项2010ZX09401-303-08

在线出版日期：2014-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：51-57