甘草酸单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

目的:制备特异性的甘草酸(GA)单克隆抗体.方法:用合成的甘草酸-牛血清白蛋白(GA-BSA)人工抗原免疫BALB/c小鼠;待血清检测阳性后,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按10∶1的比例融合;用间接竞争ELISA法和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选;用阳性细胞株诱导制备腹水抗体;用辛酸硫酸铵法纯化抗体,并进行交叉反应检测.结果:获得了稳定分泌抗甘草酸的单克隆抗体杂交瘤细胞株GA-Mab-DF5,腹水抗体纯化后纯度达98％,回收率达80％.线性检测范围为4～ 64 μg·mL-1,R2 =0.9986,并且与BSA、明胶、胆酸、去氧胆酸、芍药苷、黄芩苷等无交叉反应.结论:成功获得能稳定分泌甘草酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,灵敏度、特异性均较高,为样品中甘草酸的快速微量检测及免疫亲和色谱柱制备奠定了基础.

关键词：甘草酸、单克隆抗体、制备、鉴定、杂交瘤细胞株、免疫亲和色谱柱、酶联免疫吸附法

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家自然科学基金30973709,81274043;北京市重点实验室2011阶梯计划Z111107055311080;北京中医药大学创新团队

在线出版日期：2013-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：770-774