柱前衍生HPLC法检查壳聚糖中蛋白质残留

摘要：

目的:建立氨基酸的柱前衍生化HPLC测定法用于壳聚糖中残留蛋白质的检查.方法:壳聚糖样品经酸水解并以9-芴甲氧羰酰氯柱前衍生,用5 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH 6.7)-乙腈(80:20)和5 mmol·L-1醋酸铵缓冲液(pH 6.7)-乙腈(20:80)为流动相梯度洗脱,C18柱分离后,以荧光检测器在266 nm激发波长、313 nm发射波长处检测,外标法计算各氨基酸含量,并以总氨基酸含量作为壳聚糖中蛋白质残留量.结果:各氨基酸分离良好,过量衍生试剂和氨基葡萄糖衍生产物仅对Leu、Ile、Phe产生干扰.各氨基酸浓度在0.01 ～5.0μg· mL-1范围内线性关系良好(r＞0.99),精密度(RSD)为1.6％ ～8.5％,定量限为1.9～10.9 ng·mL-1,回收率为83.4％ ～99.3％.结论:本方法可准确测定壳聚糖中13个氨基酸并用于壳聚糖中微量蛋白质残留的检查,为评价壳聚糖质量,保证壳聚糖在医药和生物材料使用的安全性提供依据.

关键词：壳聚糖、蛋白质残留、9-芴甲氧羰酰氯、氨基酸衍生化、氨基葡萄糖、高效液相色谱

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分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家"863"计划项目2007AA091603;江苏省科技成果转化专项资金项目BA2009082;食品科学与工程国家重点实验室年度目标导向项目SKLF-MB-200805;中央高校基本科研业务费专项资金资助JKQ2011024;国家自然科学基金81202491

在线出版日期：2013-07-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：620-627