高效液相色谱法测定鼠肝微粒体中CYP1A2酶的活性及动力学考察

摘要：

目的:建立以非那西丁为探针的高效液相色谱-紫外检测的实验方法,测定大鼠肝微粒体中CYP1 A2酶活性并对其进行动力学考察.方法:采用Shimadzu Shim - Pack VP - ODS柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为:100 mmol · L-1磷酸二氢钠缓冲液(pH 4.3)和乙腈,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为室温,检测波长245 nm.非那西丁与大鼠肝微粒体在37℃温孵60 min,加入冰甲醇终止,12000 r·min-1离心10 min,取上清进行HPLC分析,以Lineweaver - Burk作图计算Vmax与Km值.结果:非那西丁、对乙酰氨基酚及其内标间乙酰氨基酚三者分离良好且无内源性干扰.对乙酰氨基酚最低检测限50 nmol·L-1,线性范围0.1～10μ mol·L-1.日内日间精密度均小于10％.回收率大于75％.动力学考察表明选择甲醇作为终止试剂效果较好,非那西丁在0.2 mg·mL-1大鼠肝微粒体体系中孵育60 min,测得动力学参数Vmax为0.21 nmol · min -1·mgprotein -1,Km为20.39 μmol ·L-1.结论:该方法稳定,结果能准确地反映CYP1 A2酶的活性,可以用于相关动力学研究.

关键词：非那西丁、对乙酰氨基酚、CYP1 A2、微粒体、高效液相色谱、药代动力学、大鼠

所属期刊栏目：32

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：重庆市自然科学基金CSTC;2009BA5083

在线出版日期：2012-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：189-193