恶性疟原虫环子孢子蛋白在无细胞表达系统的表达及纯化研究
目的:应用麦胚无细胞表达系统(Wheat Germ Cell-Free System),表达及纯化恶性疟原虫环子孢子蛋白(Circumsporozo-ite protein,CSP),以便用于免疫学评价.方法:根据从PlasmoDB检索获得的恶性疟原虫CSP基因序列,设计一对特异引物,以从ATCC获得的恶性疟原虫3D7基因组质粒(P.f.3D7 genomic DNA)为模板,经PCR反应扩增目的片段.PCR产物经NcoI与Sma I双酶切后,与经过同样酶切的pIVEX 1.3WG载体连接,随后转化大肠杆菌DH5a,经筛选获得pIVEX WG 1.3-CSP重组质粒.将该重组质粒加入到麦胚表达试剂盒并按照说明书进行表达,表达产物经亲和层析柱纯化,最终获得CSP蛋白.结果:PCR反应成功扩增CSP基因序列,并成功构建pIVEX WG 1.3-CSP重组质粒;经WB试验证明,麦胚无细胞表达系统可成功表达并纯化CSP蛋白.结论:麦胚无细胞表达系统可高效表达恶性疟原虫CSP,为CSP用于后续的诊断试剂和疫苗评价方面的研究打下了坚实的基础.
恶性疟原虫、环子孢子蛋白、麦胚无细胞表达系统
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R917(药物基础科学)
2011-12-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
1228-1231