巴斯德毕赤酵母表达人微小纤溶酶原的放大研究

摘要：

目的:研究巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达重组人微小纤溶酶原(rh-mPlg)的放大工艺.方法:分别采用1 L摇瓶、7.5 L发酵罐对Pichia pastoris工程菌rh-MPLG/GS115进行高密度培养、甲醇诱导表达.摇瓶培液经2步纯化:SP-Sepharose FF、Superdex 75;发酵罐培液经3步纯化:超滤、Sephacryl S-100、Q-Sepharose FF,活性组分透析后冷冻干燥.以组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)激活rh-mPlg,纤维蛋白平板测定其纤维蛋白溶解活性,计算并比较2种制备方法所获rh-mPlg比活性及得率.结果:采用1 L摇瓶和7.5 L发酵罐发酵可分别获得34 mg·L-1培液、210 mg·L-1培液的得率,经纯化后rh-mPlg纯度分别为95%和97%,比活性分别为加.6和23.0 U·mg-1.结论:以发酵罐生产rh-mPlg,可显著提高其产量,且比活性与摇瓶表达相近,验证了放大生产的可行性.

关键词：巴斯德毕赤酵母、纤溶酶原、表达、纯化、放大

所属期刊栏目：31

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：广东药学院博士基金43555026

在线出版日期：2011-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：66-70