正源负源比较液质联用测定酶解液中脱氧核苷酸含量
目的:建立一种快速灵敏的同时测定DNA酶解液中5”-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)、5”-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP)、5”-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)、5”-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)的超高效液相色谱质谱(UPLC-MS)方法.方法:采用UPLC-MS色谱质谱系统,安捷伦ZORBAX SB Aq-C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);以20 mmol·L-1醋酸铵缓冲盐溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(0～10 min,B相从5%→10%;10～11 min,B相从10%→90%;11～15 min,B相为90%;15～16 min,B相从90%→5%;16～18 min,B相为5%),流速0.6 mL·min-1;在电喷雾正离子模式下,采用多反应监测模式(MRM)选择性监测5”-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)(m/z 332.1/81.1和332.1/136.2)、5”-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP)(m/z 323.1/81.1和323.1/207.2)、5”-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)(m/z 348.1/152.1 348.1/313.3)和5”-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)(m/z 308.1/81.1和308.1/112.1).结果:5”-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)、5”-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP)、5”-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)和5”-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)的线性范围分别为34.8～1160.0 ng·mL-1(r=0.9997),32.8～820.0 ng·mL-1(r=0.9997),60.0～1200.0 ng·mL-1(r=0.9990),37.6～940.0 ng·mL-1(r=0.9998),检出限分别为9.4,8.48,11.43,10.35 ng·mL-1;定量限分别为31.35,28.28,38.10,34.50 ng·mL-1;样品加标回收率为71.1%～117.2%;日内、日间精密度试验的RSD为0.94%～4.99%.结论:该方法快捷,灵敏度高,专一性强,重复性好,可用于DNA酶解液中4种脱氧核苷酸的分析.
5’-腺嘌呤脱氧核苷酸(dAMP)、5’-胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP)、5’-鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP)、5’-胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP)、液相色谱质谱联用法
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R917(药物基础科学)
浙江省科技攻关项目2008C21011;浙江工商大学研究生科研创新基金1110XJ1509112
2011-04-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
2328-2333
