紫外-可见光检测器的高效液相色谱无标准品直接测量蛋白含量的可能性
目的:探讨使用紫外-可见光检测器的高效液相色谱峰面积无标准品直接测量蛋白含量的可能性.方法:通过理论推导得出色谱图峰面积与蛋白含量之间的关系式,在以下三方面检验公式及其成立前提.①用紫外-可见光分光光度计测定白蛋白溶液250～350 nm最大吸收波长和该波长下的吸收度(A),同一溶液用不接色谱柱的高效液相色谱分析,通过转换公式:吸收度(A)=流速(F)×峰面积(S)/上样体积(V),计算在某波长下吸收度值(AUV-HPLC),进而计算与UV测量值(AUV)之比百分数,得到收率;②通过pH、氯化钠浓度和乙腈浓度变化来检验白蛋白最大吸收波长和该波长下吸收度的稳定性;③估计SEC-HPLC系统在该测量中的误差.结果:推导所得公式为:蛋白含量(C)=”流速(F)×峰面积(S)”/”蛋白消光系数(ε)×样品池长(p)×进样体积(V)”.公式成立前提:①系统误差可忽略不计;②蛋白消光系数可视为不变.当高效液相色谱流速在0.8～1.0 mL·min-1之间、上样体积在20～100μL范围内白蛋白溶液回收率约为100%.当溶液pH在4.0～8.6之间、氯化钠浓度在2 mol·L-1以下时,白蛋白消光系数和最大吸收波长稳定,但乙腈浓度在50%以下时,白蛋白消光系数最大有约5%的增加.SEC-HPLC分析白蛋白的重复性RSD均＜1%.回归直线的剩余标准差与各试验点(36.5,29.2,21.9,14.6,7.3μg)峰面积之比的百分数分别为0.6%,0.7%,1.0%,1.4%,2.7%.结论:在特定条件下,紫外-可见光检测器的高效液相色谱无标准品直接测量蛋白含量可以实现.
高效液相色谱、紫外-可见光检测器、蛋白含量、流速、峰面积、蛋白消光系数、样品池长、进样体积
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R917(药物基础科学)
2010-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1684-1688
