重组hPK-5质粒DNA基因治疗制剂的质量标准研究

摘要：

目的:建立重组hPK-5质粒DNA基因治疗制剂的质量标准和检测方法.方法:采用限制性酶切图谱分析鉴定质粒DNA结构和PCR法鉴定插入的hPK-5基因作鉴别试验;采用分光光度法测定质粒DNA含量和A260/A280比值;采用琼脂糖凝胶电泳法分析质粒DNA的超螺旋构象比例和残留RNA含量;采用阴离子交换色谱法分析HPLC纯度;采用ELISA法测定hPK-5蛋白的表达量;采用内皮细胞迁移法测定hPK-5蛋白的生物学活性.结果:重组质粒DNA的限制性酶切片段大小与理论值一致;插入基因PCR扩增片段大小与理论值相符;质粒DNA含量为1.12 mg·mL-1;A260/A280比值为1.83;琼脂糖凝胶电泳法测定超螺旋构象质粒的比例为95.4%;HPLC测定超螺旋质粒DNA占93.8%,开环质粒DNA占6.2%,琼脂糖凝胶电泳法测定未检出 RNA残留;没有检出其他杂质;以2μg重组hPK-5质粒转染5×105 Hela细胞48 h后,2 mL培养上清中hPK-5蛋白浓度为109 ng·mL-1;以培养上清进行内皮细胞迁移试验,转染重组hPK-5质粒DNA组迁移的内皮细胞数明显少于对照组(P＜0.05).其他项目均符合相应的规定.结论:建立了重组hPK-5质粒DNA基凶治疗制剂的检定方法及其质量标准,为有效控制该类产品的质量打卜基础.

关键词：hPK-5、质粒DNA载体、质量控制、基因治疗

所属期刊栏目：28

分类号：R917(药物基础科学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2007AA021204

在线出版日期：2008-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：661-666