嵌合体真核表达质粒pVAX1-SPG的构建及表达研究

摘要：

目的：构建含变异链球菌表面蛋白SpaP的P区编码基因spap-P和葡聚糖结合蛋白GbpA的葡聚糖结合区编码基因gbd的嵌合体真核表达质粒pVAX1-SPG,并观察其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法：通过基因工程技术构建嵌合体真核表达质粒pVAX1-SPG,并采用脂质体转染法将其转染至293T细胞中；然后分别采用免疫组化SABC法和Western-blot检测嵌合蛋白SpaP/P-GBD在真核细胞中的表达。结果：重组真核表达质粒pVAX1-SPG经酶切、测序鉴定证实,其所携带的外源基因片段为2.4 kb的目的基因片段,序列同源性为99%；免疫组化染色结果显示,经pVAX1-SPG转染的293T细胞胞质呈棕褐色染色；Western-blot检测结果显示,分子量为72 kDa的嵌合蛋白SpaP/P-GBD能够被正确表达。结论：构建成功的嵌合体真核表达质粒pVAX1-SPG能在真核细胞293T中正确表达目的蛋白。

关键词：变异链球菌、表面蛋白抗原、葡聚糖结合蛋白、哺乳动物细胞、真核表达

分类号：R780.2(口腔科学)

资助基金：贵州省科技创新人才团队建设项目[黔科合人才团队20134026]贵州省高等学校重点学科建设项目SZXK-201207-04省市科技合作专项资金项目[省市科合201441号]贵州省高等学校特色重点实验室建设项目黔教合KY字2013109

在线出版日期：2015-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：645-650