富血小板血浆对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨影响的实验研究

摘要：

目的:探讨富血小板血浆(platelet - rich plasma,PRP)对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSC)体外成骨能力的影响.方法:体外分离、培养rBMSC,经细胞表面标记物检测和体外诱导分化鉴定后,分别采用WTT法检测PRP对细胞增殖活性的影响；细胞化学法检测PRP对成骨诱导后rBMSC碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)活性的影响；RealTime- PCR检测PRP对细胞成骨分化指标Col-3、OPN mRNA表达水平的影响；扫描电镜观察PRP对rBMSC在Bio-Oss上粘附的影响.结果:rBMSC 传代后细胞生长状态相对稳定,呈梭形；细胞表面标记物CD29阳性率为88.2％,CD90阳性率为98％,CD34细胞阴性率为2.8％,CD45细胞计数阴性率为2.7％；成骨诱导21 d后,茜素红染色可见明显矿化结节；成脂诱导14d后,油红O染色可见红色脂滴形成.MTT检测,10％ PRP组在培养1、3、5、7、9d各时间点的OD值均显著高于空白对照组(P＜0.05).ALP染色显示,无论是诱导培养7d还是14 d,成骨诱导液+PRP组的ALP活性均明显高于单纯成骨诱导液组,差异有统计学意义(P＜0.05)；另外,各组不同诱导培养时间点相比还发现,无论是实验组还是对照组,在诱导7d时,ALP活性均较低；而在14 d,ALP的活性明显升高.RealTime-PCR检测显示,单纯10％ PRP诱导培养7d和14 d后细胞Col-3、OPN mRNA水平虽稍低于成骨诱导液组,但明显高于空白对照组,而10％ PRP联合成骨诱导液诱导培养7d和14d的Col-3、OPN mRNA的表达量更高,与其他各组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).另外各组诱导培养14d的Col-3、OPN mRNA水平显著高于相应的7d组(P＜0.05).扫描电镜结果显示PRP明显促进rBMSC在Bio-Oss骨粉上的粘附与伸展.结论:PRP对rBMSC的增殖、成骨分化,以及在生物材料上的粘附能力均具有明显的促进作用.

关键词：骨髓间充质干细胞、富血小板血浆、Bio-Oss骨粉、成骨分化

所属期刊栏目：21

分类号：R780.2(口腔科学)

在线出版日期：2012-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：549-554,572