CD146在视网膜血管内皮细胞中的功能和机制

摘要：

目的：:研究黑色素瘤细胞黏附分子（CD146）在视网膜血管内皮细胞中的功能及机制。方法：:实验研究。于2021年1—6月构建氧诱导视网膜病变模型（OIR）小鼠16只作为实验组，以同日龄正常饲养小鼠16只作为对照组。采用免疫磁珠法分离视网膜血管内皮细胞；定量PCR分别检测2组小鼠mRNA的表达水平；免疫荧光染色检测小鼠视网膜上CD146的定位和表达。取人视网膜微血管内皮细胞（HRMEC）在1% O
2环境中培养，Western blot检测HRMEC细胞和小鼠视网膜中CD146的蛋白表达水平。CD146小干扰RNA（siCD146）转染HRMEC作为siCD146转染组，无义小干扰RNA转染作为转染对照组（NC）。采用细胞活力测定实验（MTS）、细胞增殖实验（EDU）、流式细胞术分别检测siCD146转染组和NC细胞活力、细胞增殖和细胞周期；Transwell和划痕实验检测HRMEC的迁移能力；血管生成实验检测HRMEC的血管形成能力。OIR小鼠右眼玻璃体腔注射siCD146作为siCD146注射组，左眼注射无义小干扰RNA作为阴性注射对照组（NC），采用血管免疫荧光染色观察注射后OIR小鼠眼底新生血管的情况。采用独立样本
t检验进行实验数据分析。
结果：:免疫荧光染色显示，CD146在小鼠视网膜血管上特异性表达。OIR小鼠视网膜血管内皮细胞中CD146 mRNA表达水平是正常小鼠的2倍（
t=6.57，
P=0.003）。与21% O
2处理相比，1% O
2处理的HRMEC中CD146蛋白表达升高（
t=5.79，
P=0.010）。与NC组细胞相比，siCD146转染组细胞迁移和血管生成能力均受到明显抑制（Transwell：siCD146-1：
t=6.15，
P=0.003；siCD146-2：
t=3.88，
P=0.005。划痕：siCD146-1：
t=2.73，
P=0.041；siCD146-2：
t=4.10，
P=0.006。血管生成：siCD146-1：
t=2.81，
P=0.048；siCD146-2：
t=3.10，
P=0.036）。Western blot结果显示：与NC相比，siCD146转染组的Ras同源家族成员A（RHOA） （siCD146-1：
t=3.60，
P=0.023；siCD146-2：
t=4.12，
P=0.015）、磷酸化p38蛋白（siCD146-1：
t=2.89，
P=0.044；siCD146-2：
t=3.07，
P=0.038）表达均下调。视网膜铺片结果显示：与NC相比，siCD146注射组小鼠视网膜上的新生血管、无血管区面积均减少（
t=8.94，
P=0.001；
t=11.24，
P=0.001）。视网膜Western blot结果显示：相较于NC，siCD146注射组中CD146 （
t=5.62，
P=0.030）、磷酸化p38蛋白（
t=6.87，
P=0.021）、RHOA（
t=5.06，
P=0.037）表达均下调。
结论：:敲减CD146可以通过下调p38和RHOA的表达从而抑制视网膜血管内皮细胞的迁移和血管生成。

关键词：视网膜、黑色素瘤细胞黏附分子、视网膜血管内皮细胞、新生血管、细胞迁移

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资助基金：国家自然科学基金81900818;温州市基础性科研项目Y20220144;省部共建眼视光学和视觉科学国家重点实验室资助项目J02-20190201;National Natural Science Foundation of China81900818;Foundation of Wenzhou Basic Research ProjectsY20220144;The Project of State Key Laboratory of Ophthalmology, Optometry and Visual ScienceJ02-20190201

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：332-339