SIRT1对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的表观遗传调控

摘要：

目的：:探讨沉默信息调节蛋白1（SIRT1）对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响。方法：:实验研究。通过定量PCR和Western blot法检测SIRT1在葡萄膜黑色素瘤细胞（M23和SP6.5）和正常人葡萄膜黑色素细胞（DM78、UM95和UM96）中的表达。在葡萄膜黑色素瘤细胞（M23、SP6.5）中，用EX527抑制SIRT1活性，以溶剂DMSO作为阴性对照组；用SIRT1小干扰RNA（siSIRT1）转染细胞抑制SIRT1表达，以无义小干扰RNA（NC）转染作为阴性对照组。细胞增殖实验（MTS）、流式细胞术、平板克隆形成实验分别检测细胞活性、细胞周期以及细胞克隆形成能力。裸鼠眼内成瘤实验检测葡萄膜黑色素瘤细胞眼内成瘤能力。Western blot法检测增殖相关蛋白。组间数据均采用独立样本
t检验进行比较。
结果：:与葡萄膜黑色素细胞相比，葡萄膜黑色素瘤细胞（M23、SP6.5）中SIRT1 mRNA（
t=17.08，
P<0.001；
t=13.24，
P<0.001）和蛋白（
t=6.26，
P=0.008）表达水平显著升高。MTS结果显示，EX527抑制M23和SP6.5细胞活性，并呈药物浓度依赖性；与NC转染组相比，siSIRT1转染组细胞活性显著减弱（
t=5.94，
P<0.001；
t=10.73，
P<0.001）。与溶剂DMSO组相比，EX527处理组（
t=5.10，
P=0.047；
t=7.57，
P=0.002）和SIRT1 siRNA转染组（
t=6.41，
P=0.003；
t=6.10，
P=0.004）中处于G1期的细胞比例均显著升高。另外，M23和SP6.5细胞EX527处理组（
t=5.04，
P=0.001；
t=5.93，
P<0.001）和siSIRT1转染组（
t=11.44，
P<0.001；
t=8.24，
P<0.001）克隆形成数量显著降低。在裸鼠眼内成瘤实验中，与NC组相比，siSIRT1转染组眼内瘤体大小显著变小（
t=5.50，
P<0.001）。Western blot结果显示，与DMSO处理组相比，EX527处理组中P21（
t=4.63，
P=0.010；
t=7.90，
P=0.001）表达升高，E2F1（
t=12.10，
P=0.003；
t=5.96，
P=0.004）、CYCLIND2（
t=36.28，
P<0.001；
t=16.58，
P<0.001）、p-RB（
t=17.55，
P<0.001；
t=21.34，
P<0.001）表达降低，p-AKT表达下调。与NC转染组相比，siSIRT1转染组中，P21（
t=5.88，
P=0.004；
t=10.51，
P<0.001）表达升高，E2F1（
t=4.60，
P=0.01；
t=4.89，
P=0.008）、CYCLIND2（
t=5.13，
P=0.007；
t=5.63，
P=0.005）、p-RB（
t=4.45，
P=0.011；
t=6.53，
P=0.003）表达水平降低，p-AKT（
t=9.61，
P<0.001；
t=6.44，
P=0.003）表达下调。
结论：:抑制SIRT1活性或表达可以明显抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖，提示SIRT1可以作为治疗葡萄膜黑色素瘤的一个新靶标。

关键词：沉默信息调节蛋白1、EX527、葡萄膜黑色素瘤细胞、细胞增殖

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资助基金：国家自然科学基金81900818;温州市科技计划项目Y20170761;National Natural Science Foundation of China81900818;Foundation of Wenzhou Science & Technology Plan ProjectY20170761

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：329-336