高糖对体外培养视网膜Müller细胞自噬及凋亡的影响

摘要：

目的：:探究高糖诱导体外培养的视网膜Müller细胞自噬及凋亡的变化。方法：:实验研究。将体外培养的SD大鼠视网膜Müller细胞根据不同糖浓度分为5.5 mmol/L葡萄糖组（正常组）及20、30、40、50 mmol/L高糖组，并对40 mmol/L高糖处理Müller细胞组采用不同时间3、6、12、24、36 h进行培养。使用蛋白免疫印迹法及细胞免疫荧光检测自噬指标LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、自噬信号通路P62、Beclin-1蛋白表达及细胞定位；使用透射电镜及GFP-LC3慢病毒转染观察自噬小体的形成情况；使用TUNEL实验检测细胞凋亡状态。不同组别间数据比较采用单因素方差分析。结果：:正常组及20、30、40、50 mmol/L高糖组中Müller细胞质的Beclin-1、P62及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白相对表达量总体比较，差异均有统计学意义（
F=131.21，
P=0.029；
F=197.25，
P=0.012；
F=100.02，
P=0.045），其中与正常组比较各浓度高糖组Müller细胞质内Beclin-1、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白均明显降低（
P<0.05），P62蛋白相对表达量明显增加（
P<0.001）。正常组以及6、12、24、36 h高糖组中Müller细胞质的Beclin-1、P62及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白相对表达量总体比较，差异均有统计学意义（
F=98.46，
P=0.015；
F=109.48，
P=0.004；
F=99.27，
P=0.032），其中6 h高糖组LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白明显增加（
P=0.002、0.015），12、24、36 h高糖组与正常组相比较LC3Ⅰ/LC3Ⅱ、Beclin-1蛋白均明显下降（
P<0.05），P62蛋白明显增加（
P<0.001）。正常组及6、24 h高糖组视网膜Müller细胞中GFP-LC3转染阳性颗粒、自噬小体相对数量组间总体差异有统计学意义（
F=240.49，
P=0.014；
F=198.98，
P=0.001），其中与正常组比较，6 h高糖组GFP-LC3转染阳性颗粒、自噬小体相对数量增加（
P=0.002、0.029），24 h高糖组明显降低（
P=0.019、0.036）。正常组及6、24 h高糖组及3MA组视网膜Müller细胞凋亡指数分别为3.14±1.01、15.34±3.87、25.82±4.96、24.79±4.01，总体比较差异有统计学意义（
F=234.12，
P=0.003），与正常组比较，6、24 h高糖组TUNEL阳性细胞增多（
P=0.022、0.039），24 h高糖组与6 h高糖组比较TUNEL阳性细胞进一步增加（
P=0.017）。
结论：:高糖诱导体外培养的视网膜Müller细胞早期自噬增加，细胞凋亡抑制，随着时间不断延长，高糖抑制自噬形成，增加细胞凋亡。高糖抑制自噬可能是促进Müller细胞凋亡的重要原因。

关键词：糖尿病视网膜病变、高糖、自噬、凋亡、Müller细胞

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资助基金：苏州市民生科技项目SYS2018004，SS201758;江苏省自然科学基金BK20191177;Fundings: Suzhou Science and Technology Bureau ProjectSYS2018004, SS201758;Jiangsu Provincial Natural Science FoundationBK20191177

在线出版日期：2023-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：17-26